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生物緩沖劑對生化檢測有哪些影響
2021/05/29 17:05
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生物緩沖劑是生化檢測中應用最普遍的輔助試劑,幾乎所有液相反應體系的檢測都需要用到緩沖劑。其主要作用是維持反應體系的pH值,常用的緩沖劑有磷酸鹽、醋酸鹽、銨鹽,以及生化實驗中的Tris、MOPS、HEPES等。
生物緩沖劑對生化檢測的影響有很多,主要體現在溶液酸堿度(pH值)方面,具體的影響下面舉例說明。
多種多樣的生物緩沖劑
緩沖劑對酶活的影響:
大多數生化檢測都是有酶參與的反應,酶的催化效率受pH值和溫度的影響很大,每一種酶都有其最適pH值(酶催化反應效率最大時所處的pH值),因此有酶參與的生化檢測需要首先根據所使用的酶制劑的最適pH值挑選合適緩沖范圍的緩沖劑。比如Trinder’s試劑酶法檢測、酶聯免疫分析等。
緩沖劑對大分子結構的影響:
緩沖劑除了對酶的催化效率有影響之外,還可能影響酶的結構,如果體系的pH值和酶的適應pH值相差過大,可能會導致酶直接失活。另一方面,即使沒有酶參與的反應,緩沖劑也是必要的,生化檢測中往往涉及到許多大分子物質,其結構也受pH值影響。
比如吖啶酯化學發光檢測,雖然吖啶酯與過氧化氫的反應不需要酶的催化可以直接發光,但CLIA分析中吖啶酯通常是標記的蛋白、抗原、抗體或者核酸,這些大分子物質結構復雜,受體系pH的值影響,因此同樣需要生物緩沖劑。
緩沖劑對滲透壓的影響:
很多緩沖劑還是有機弱酸弱堿共軛酸堿對,不同的緩沖劑其離子強度也不一樣,對體系的鹽濃度、滲透壓有影響。細胞培養常用HEPES作緩沖劑,而不能使用影響細胞膜滲透壓可能引起破裂的緩沖劑。
此外,不同的緩沖劑對不同金屬離子的絡合能力也不一樣,如含鈣、鎂離子的體系用Tris緩沖劑而不用PBS,很多酶以及蛋白質的活性與金屬離子濃度有關。德晟是生化緩沖劑老牌廠家,可供應十多種生物緩沖劑。
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